SU1442548A1 - Method of producing immobilized protosubtyline - Google Patents
Method of producing immobilized protosubtyline Download PDFInfo
- Publication number
- SU1442548A1 SU1442548A1 SU854035527A SU4035527A SU1442548A1 SU 1442548 A1 SU1442548 A1 SU 1442548A1 SU 854035527 A SU854035527 A SU 854035527A SU 4035527 A SU4035527 A SU 4035527A SU 1442548 A1 SU1442548 A1 SU 1442548A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- carrier
- activity
- solution
- protosubtilin
- enzyme
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims abstract description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 23
- 108010027350 protosubtilin Proteins 0.000 abstract description 16
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 abstract description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 abstract description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 abstract description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 abstract description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000271 synthetic detergent Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 7
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 5
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005461 Bremsstrahlung Effects 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к химико- фармацевтической промышленности, а именно к биологически активным соединени м , конкретно к иммобилизованным протеазам, которые могут быть использованы в производстве биопрепаратов , добавок к синтетическим моющим средствам, парфюмерии, ветеринарии , медицине. Цель изобретени - повышение качества целевого продукта. Способ заключаетс в иммобилизации протосубтилина на органическом носителе . В качестве носител используют полиэтиленоксид с мол.м. 600-2000 ки- лодальтон при соотношении носител и фермента 1:7,5-1:8,5. Смесь носител и фермента в водном растворе подвергают обработке у-лучами дозой 2,3- 2,7 мрад. Полученный npenapat обладает повьппенной активностью и термостабильностью и, кроме того, активен в более широком диапазоне рН. 5S (Л 4 4 rs: ел 4 00The invention relates to the chemical and pharmaceutical industry, namely to biologically active compounds, specifically to immobilized proteases, which can be used in the production of biologics, additives to synthetic detergents, perfumery, veterinary medicine, and medicine. The purpose of the invention is to improve the quality of the target product. The method involves immobilization of protosubtilin on an organic carrier. As the carrier use of polyethylene oxide, mol.m. 600-2000 kilodalton with the ratio of carrier and enzyme 1: 7.5-1: 8.5. The mixture of the carrier and the enzyme in an aqueous solution is subjected to a y-ray treatment of a dose of 2.3-2.7 mrad. The obtained npenapat has a high activity and thermal stability and, moreover, is active in a wider pH range. 5S (L 4 4 rs: ate 4 00
Description
Изобретение относитс к химико-фармацевтической промышленности, а именно к биологически активным химическим соединени м, конкретно к иммобилизо- ванным протеазам, которые могут быть использованы в производстве биопрепаратов , добавок к синтетическим моющим средствам, парфюмерии, ветеринарии, медицине и т.д.The invention relates to the chemical and pharmaceutical industry, namely to biologically active chemical compounds, specifically to immobilized proteases, which can be used in the production of biologics, additives to synthetic detergents, perfumery, veterinary medicine, medicine, etc.
Цель изобретени - повьшение качества иммобилизованного протосубти- лина.The purpose of the invention is to improve the quality of immobilized protosubtilin.
Способ заключаетс g иммобилизации протосубтилина на полиэтиленоксиде с мол. массой 600-2000 кВ при соотношении носител и фермента 1:7,5 - 1:8,5 Смесь носител и фермента в водном растворе подвергают обработке у-лучам в-дозе 2,3-2,7 мрад. The method consists in g immobilization of protosubtilin on polyethylene oxide mol. mass of 600-2000 kV with the ratio of carrier and enzyme 1: 7.5 - 1: 8.5 The mixture of carrier and enzyme in an aqueous solution is treated with γ-rays in a dose of 2.3-2.7 mrad.
Св занные между протосубтилином и полимерным носителем осуществл етс радиохимическим воздействием в растворе. Это позвол ет получать конечный продукт в виде водного раствора иммобилизованных протеаз, обладающих высокой протеолитической активностью (по казеину) до 100 ПЕ/мл, высокой термостабильностью в присутствии субстрата, способных гидроли- зовать субстрат в широком дипазоне рН, про вл при этом высокую активность . Неспецифическое комплексо- образование между полиэтиленоксидом I и протосубтилином в водном растворе способствует иммобилизации в результате сбл ижёни реагирующих молекул в момент радиохимического взаимодействи .The bound between protosubtilin and the polymer carrier is carried out by radiochemical action in solution. This allows to obtain the final product in the form of an aqueous solution of immobilized proteases with high proteolytic activity (for casein) up to 100 PE / ml, high thermal stability in the presence of a substrate capable of hydrolyzing the substrate in a wide pH range, while exhibiting high activity. Nonspecific complex formation between polyethylene oxide I and protosubtilin in an aqueous solution promotes immobilization as a result of blending of reacting molecules at the moment of radiochemical interaction.
Пример1.5г протосубтилина раствор ют в 95 мл 0,05 М боратного буфера рН 8,4 при в течение ,30 мин. Нерастворившийс осадок отдел ют центрифугированием при 7100 g в течение 30 мин. К 8 мл супернатанта добавл ют 42,5 мл 10,0%-ного водного раствора полиэтиленоксида 1500. Соот ношение (весовое) протосубтилин:поли™ этиленоксид 1:8,5. Смесь фермента с носителем облучают тормозным 1е;-из- .лучением в дозе 2,5 мрад.Example 1.5 g of protosubtilin is dissolved in 95 ml of 0.05 M borate buffer, pH 8.4, for 30 minutes. The undissolved precipitate was separated by centrifugation at 7100 g for 30 minutes. To 8 ml of the supernatant was added 42.5 ml of a 10.0% aqueous solution of polyethylene oxide 1500. The ratio (by weight) of protosubtilin: poly ™ ethylene oxide was 1: 8.5. The mixture of the enzyme with the carrier is irradiated with inhibitory 1e; - radiation from a dose of 2.5 mrad.
При этом получаетс продукт со следующими свойствами.A product with the following properties is obtained.
Протеолитическа активность 93,0 ПЕ/мл,Proteolytic activity of 93.0 PE / ml
Термостабильность.Thermostability.
37 45 50 60 70 80 37 45 50 60 70 80
Активность, %: 34 46 71 100 49 8Activity%: 34 46 71 100 49 8
5 050
5 о 5 o
5 five
5five
00
5five
Зависимость активности от рН субстрата (1% сывороточного альбумина): рН 6,0 8,2 8-,6 11,0The dependence of the activity on the pH of the substrate (1% serum albumin): pH 6.0 8.2 8-, 6 11.0
Активность, %: 47 66 68 100Activity%: 47 66 68 100
Продукт растворим. Выход 98,OJt1,0%.The product is soluble. Exit 98, OJt1.0%.
П р и м е р 2. Готов т раствор протосубтилина по методике, описанной в примере 1. К 8 мл раствора протосубтилина (супернатанта) добавл ют 37,5 мл 10,0%-ного раствора полиэтиленоксида 1500. Массовое соотношение протосубтилин:полиэтиленоксид 1:7,5. Смесь облучают тормозным -излучением в дозе 2,5 мрад.PRI mme R 2. Prepare a solution of protosubtilin according to the procedure described in Example 1. To a 8 ml solution of protosubtilin (supernatant) was added 37.5 ml of a 10.0% polyethylene oxide 1500 solution. : 7.5. The mixture is irradiated with bremsstrahlung at a dose of 2.5 mrad.
Свойства получаемого продукта.Properties of the resulting product.
Протолитическа активность 105,0 ПЕ/мл.The protolytic activity is 105.0 PE / ml.
Термостабильность.Thermostability.
t, C::37 45 50 60 70 80t, C :: 37 45 50 60 70 80
Активность, %: 34 46 71 100 49 8Activity%: 34 46 71 100 49 8
Зависимость активности от рН субстрата (1% сывороточного альбумина):The dependence of activity on the pH of the substrate (1% serum albumin):
рН: 6,0 .8,2 8,6 11,0pH: 6.0 .8.2 8.6 11.0
Активность, %: 47 66 78 100Activity%: 47 66 78 100
Продукт растворим. Выход 98,0.± ±1,0%.The product is soluble. Output 98.0. ± 1.0%.
П р и м 8 р 3. Готов т раствор протосубтилина по методике, описанной в примере 1. К 8 мл раствора протосубтилина (супернатанта) добавл ют 40,0 мл 10,0%-ного раствора полиэтиленоксида 1500. Смесь облучают тормозным )| -излучением в дозе 2,3 мрад.Example 8 Prepare a solution of protosubtilin according to the procedure described in Example 1. To 8 ml of the solution of protosubtilin (supernatant), 40.0 ml of 10.0% polyethylene oxide 1500 solution are added. The mixture is irradiated with a brake) | -radiation in a dose of 2.3 mrad.
Свойства получаемого продукта.Properties of the resulting product.
Протеолитическа активность 120,0 ПЕ/мл.Proteolytic activity 120.0 PE / ml.
Термостабильность,Thermal stability
t,C; 37 45 50 60 70 80 Активность,%: 40 49 70 100 48 8t, C; 37 45 50 60 70 80 Activity,%: 40 49 70 100 48 8
Зависимость активности от рН субстрата (1% сывороточного альбумина): рН: 6,0 8,2 8,6 11,0The dependence of the activity on the pH of the substrate (1% serum albumin): pH: 6.0 8.2 8.6 11.0
Активность, %t 50 65 71 100Activity,% t 50 65 71 100
..
Продукт водорастворим. Выход 98,0± i1,0%.The product is water soluble. Output 98,0 ± i1,0%.
Пр имер4. Готов т раствор протосубтилина по методике, описанной в примере 1. К 8 мл раствора протосубтилина (супернатанта) добавл ют 40,0 МП 10,0%-ного раствора полиэтиленоксида 1500,Pr imer4. Prepare a solution of protosubtilin according to the procedure described in Example 1. To 8 ml of a solution of protosubtilin (supernatant), 40.0 MP 10.0% solution of polyethylene oxide 1500 are added,
10ten
2020
Смесь облучают тормозным If-излучением в-дозе 2,7 мрад.The mixture is irradiated with inhibitory If-radiation at a dose of 2.7 mrad.
Свойства полученного продукта. Протеолитическа активность 80 ПЕ/мл.Properties of the obtained product. Proteolytic activity 80 PE / ml.
Термостабильность.Thermostability.
t, C: 37 45 50 60 70 80t, C: 37 45 50 60 70 80
, Активность.%: 40 47 67 100 50 10, Activity.%: 40 47 67 100 50 10
Зависимость активности от рН субстрата (1 % сывороточного альбумина).The dependence of activity on the pH of the substrate (1% serum albumin).
рН 6,0 8,2 8,6 11,0 15pH 6.0 8.2 8.6 11.0 15
Активность,%: 53 69 70 100 Продукт водорастворим. Выход 98,0±Activity%: 53 69 70 100 The product is water soluble. Output 98.0 ±
ti,o%.ti, o%.
П р и м е р 5. Готов т раствор про- тосубтилина по методике, описанной примере 1. К 8 мл раствора прото- убтилина (супернатанта) добавл ют 40,0 мл 10,0%-ного раствора полиэтиеноксида 600. Смесь облучают тормозным J-излучением в дозе 2,5 мрад.EXAMPLE 5 Preparing a solution of protosubtilin according to the procedure described in Example 1. To a 8 ml solution of protobothylin (supernatant) was added 40.0 ml of a 10.0% solution of polyethylene oxide 600. The mixture was irradiated with a brake fluid. J-radiation in a dose of 2.5 mrad.
Свойства получаемого продукта.Properties of the resulting product.
Протеолитическа активность 5,0 ПЕ/мл. . Термостабильность.Proteolytic activity 5.0 PE / ml. . Thermostability.
t,C: 37 45 50 60 70 80 Активность,%: 38 51 70 100 45 11t, C: 37 45 50 60 70 80 Activity,%: 38 51 70 100 45 11
Зависимость активности от рН субтрата (1% сывороточного альбумина):Dependence of activity on the pH of the subtrate (1% serum albumin):
рН- 6,0 8,2 8,6 11,0 Активность,%: 51 70 78 100pH 6.0 8.2 8.6 11.0 Activity,%: 51 70 78 100
Продукт водорастворим. Выход 8,011,0%.The product is water soluble. Yield 8,011.0%.
2525
30thirty
35 35
4040
П р и м е р 6. Готов т раствор протосубтилйна Г10Х по методике, описанной в примере 1. К 8 мл раство- 45 дозой 2,3-2,7 мрад.PRI me R 6. Prepare a solution of protosubtilin G10X according to the procedure described in Example 1. To a 8 ml solution of a dose of 2.3-2.7 mrad.
Способ получени 35 протосубтилйна, вкл действие раствора ф рата с органическим личающийс лью повьшени качес дукта, в качестве н полиэтиленоксид с м 2000 kD, уста навлив носитель-фермент 1: следующим облучениеThe method of obtaining 35 protosubtilina, including the action of an organic solution of the solution with an organic solution, as n polyethylene oxide with m 2000 kD, establishing carrier-enzyme 1: the following irradiation
10ten
44254844425484
ра протосубтилйна (супернатанта) до- бавл ют 40,0 мл 10,0%-ного раствора полиэтиленоксида 2000. Смесь облучают тормозным Х -излучением в дозе 2,5 мрад.A 40 ml of 10.0% solution of polyethylene oxide 2000 is added to the protosubtilina (supernatant). The mixture is irradiated with X-radiation in a dose of 2.5 mrad.
Свойства полученного продукта.Properties of the obtained product.
Протеолитическа активность 110,0 ПЕ/мл.Proteolytic activity 110.0 PE / ml.
Термостабильность.Thermostability.
. Ч, 45 50 60 70 80 Активность,%.: 41 60 71 100 60 15. H, 45 50 60 70 80 Activity,% .: 41 60 71 100 60 15
Зависимость активности от-рН субстрата (1% с шороточного альбумина): рН 6,0 8,2 8,6 11,0Dependence of activity on substrate pH (1% of short albumin): pH 6.0 8.2 8.6 11.0
Активность,%: 56 80 81 100Activity%: 56 80 81 100
Продукт водорастворим. Выход 98,О± ±1,0%.The product is water soluble. Exit 98, ± ± 1.0%.
Таким образом, использование предлагаемого способа позвол ет получать иммобштизованныи протосубтилин с улучшенными качественными характеристиками , а именно с высокой протеоло- гической. активностью, с повышенной термостабильностью в присутствии субстрата и с расширенным рН-оптимумом активности.Thus, the use of the proposed method allows to obtain immobilized protosubtilin with improved qualitative characteristics, namely, with a high proteological one. activity, with increased thermostability in the presence of the substrate and with an enhanced pH-optimum activity.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU854035527A SU1442548A1 (en) | 1985-12-23 | 1985-12-23 | Method of producing immobilized protosubtyline |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU854035527A SU1442548A1 (en) | 1985-12-23 | 1985-12-23 | Method of producing immobilized protosubtyline |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1442548A1 true SU1442548A1 (en) | 1988-12-07 |
Family
ID=21225823
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU854035527A SU1442548A1 (en) | 1985-12-23 | 1985-12-23 | Method of producing immobilized protosubtyline |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1442548A1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2137835C1 (en) * | 1998-11-10 | 1999-09-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Биолекс" | Method of preparing water-soluble immobilized enzyme preparation |
-
1985
- 1985-12-23 SU SU854035527A patent/SU1442548A1/en active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2137835C1 (en) * | 1998-11-10 | 1999-09-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Биолекс" | Method of preparing water-soluble immobilized enzyme preparation |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3931397A (en) | Biologically active material | |
| GB1521032A (en) | Biological treatment | |
| ES8800170A1 (en) | A PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF PIRAZOLO- AND PIRIDAZO-PIRAZOLINAS, -PIRIDAZINAS AND -DIACEPINAS | |
| NO982364D0 (en) | Process for the preparation of morphologically uniform microcapsules, as well as microcapsules prepared by the method | |
| RU95114376A (en) | Nitroesters exhibiting pharmacological activity and method of their synthesis | |
| NO169290C (en) | ANALOGY PROCEDURE FOR PREPARING A THERAPEUTIC ACTIVE TETRAPYRROL-AMINO-DICARBOXYLIC ACID ADD | |
| ES8501414A1 (en) | Process for the organic synthesis of oligonucleotides containing galactosamin-uron-acid motives, oligosaccharides obtained and their biological applications. | |
| Harris Jr et al. | Collagenase in carcinoma cells | |
| Buxbaum et al. | Immunoglobulin M heavy chain disease: intracellular origin of the mu chain fragment | |
| SU1442548A1 (en) | Method of producing immobilized protosubtyline | |
| ATE22096T1 (en) | VINYLENE CARBONATE POLYMERS, PROCESS FOR THEIR PRODUCTION AND ITS APPLICATION. | |
| FR2385767A1 (en) | IONIC PULLULANE GELS AND PROCESS FOR THEIR PREPARATION | |
| US4349630A (en) | Heat-resistant water soluble urokinase derivative | |
| ATE90354T1 (en) | POLYDEOXYRIBONUCLEOTIDES, PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS, USE AND PRODUCTION OF POLYDEOXYRIBONUCLEOTIDES. | |
| Wang et al. | Activation of the action of penicillopepsin on leucyl-tyrosyl-amide by a non-substrate peptide and evidence for a conformational change associated with a secondary binding site | |
| Konno et al. | Isolation of a glycine-carbohydrate residue from muscle collagen | |
| GB1436529A (en) | Process for preparing a blood fraction | |
| OA04770A (en) | New carbonic acid derivatives of 2-mercapto-4,5-dichlorothiazole, their preparation process and their application as herbicides. | |
| JPS61233694A (en) | Growth factor contained in bovine spleen and method of isolating same | |
| Jordan et al. | In vitro properties and organ uptake of rat band 3 cross-linked erythrocytes | |
| Gavard et al. | Purification and some properties of a ribonuclease from rat liver ribosomal fraction | |
| ZA845434B (en) | Complexable heterogeneous oligosaccharides and alpha-hydosanes having therapeutical activity,process for their preparation and related pharmaceutical compositions | |
| Shooter | Physical state of deoxyribonucleic acid in rat thymus homogenates | |
| DE2407340A1 (en) | SUBSTANCE AND METHOD OF MANUFACTURING IT | |
| JPS62114919A (en) | Production of immunoglobulin for intravenous injection |